Обратная транскриптаза BioReady I — это сконструированная версия обратной транскриптазы вируса лейкемии мышей Молони (M-MLV) с пониженной активностью РНКазы H и повышенной термостабильностью. Фермент может использоваться для синтеза более высокопроизводительной первой цепи кДНК при более высокой температуре, чем обычный M-MLV.

    1. Используя извлеченную общую РНК из печени мыши, общую РНК подвергли 10-кратному градиентному разведению и обратной транскрипции. Одна десятая продукта первой цепи кДНК использовалась в качестве матрицы для амплификации с премиксом BSB70, и уровень экспрессии гена HBB был определен (с использованием метода на основе зонда). Результаты показаны на рисунке ниже.

Результаты: Результаты показывают R² = 0,9998, что указывает на превосходную линейность. Обратная транскриптаза может эффективно осуществлять обратную транскрипцию шаблонов при различных концентрациях, включая такие низкие концентрации, как 10 пг общей РНК, демонстрируя высокую эффективность амплификации.

2. Используя различные концентрации РНК SARS-CoV-2 в качестве матриц, была проведена одношаговая обратная транскрипционная амплификация, в том числе с использованием обратной транскриптазы BioReady I. Уровни экспрессии гена N, гена O, гена E и внутреннего референса были обнаружены (с использованием зондового метода, в четырехкратной повторности). Результаты одношаговой обратной транскрипционной амплификации были сравнены с аналогичными реагентами импортного производителя (T) и отечественного производителя (B). Увеличение амплификации было выше, чем у реагентов сопоставимого производителя, а значения Ct были более ранними, чем у реагентов сопоставимого производителя. Результаты амплификации показаны в таблице ниже:

    Результаты: Результаты показывают, что обратная транскриптаза BioReady I имеет более высокую эффективность обратной транскрипции по сравнению с реагентами марки T и марки B.